Callie i Marie, pod pseudonimem Squid Sisters są zespołem pop występującym w pierwszej części oraz w DLC expansion pass do części trzeciej. Ich motto brzmi "stay fresh!", gestem są falujące dłonie skierowane w dół. Callie i Marie występują w każdym podstawowym trybie fabularnym, gdzie kierują nas przez grę zaraz po Kapitanie Cuttlefish. Zawsze wykonują utwór Calamari Inkantation, który jest pewnego rodzaju hymnem i może powstrzymać hipnozę DJ Octavio. Są dostępne 3 warianty - classic, spicy (część druga) oraz 3mix razem z zespołem Deep Cut.
Agent 3
Agent 3 to tak naprawdę my, wcielamy się w naszą wykreowaną postać gdzie walczymy przeciw Octarianom pod dowódctwem powracającego antagonisty DJ Octavio. Postać jest niema, ale rozumie wszystkie polecenia. Agent 3 powraca jako mniejsza postać fabularna w Splatoon 3, zastępując Kapitana Cuttlefish jako nowy dowódca Nowego Squidbeak Splatoon.
Antagoniści
DJ Octavio
DJ Octavio jest powracającym antagonistą, ze swoją armią Octarianów zabiera źródło energii (the Great Zapfish) z miasta i próbuje podbić powierzchnię. Jest starym przyjacielem Kapitana Cuttlefish, czego dowiadujemy się poprzez stare zwoje.
Octarians
Octarianie są żołnierzami DJ Octavio, są w różnych wariantach w np. DLC jak i w głównym story mode Splatoon 3.
Pearl i Marina
Pearl i Marina są częścią Off The Hook,zespołu ze Splatoon 2, są również protagonistkami w Octo Expansion. Ich gestem jest jedna ręka w górze a druga w dole, lekko falujące. Ich mottem jest "Don't get cooked, stay off the hook!".
Deep Cut
Shiver, Big Man i Frye
Deep Cut są grupą muzyczną w Splatoon 3, charakteryzują się stylem który miesza gatunki muzyki z różnych regionów świata w np. Anarchy Rainbow. Poza występowaniem są też grupa przestępczą, która próbuje nas zatrzymać w trybie fabularnym.